由于猪炭疽多呈慢性或隐性,临诊症状不明显,急性病例也少见,发生炭疽或疑似炭疽时禁止剖检,炭疽病的正确诊断十分重要,所以必须进行实验室检查,血清学诊断。
1、临诊症状及流行情况调查
临诊症状的诊断价值不大,调查某些地区有否炭疽病发生、是否炭疽的疫源地等资料,可供诊断参考。
2、细菌抹片、镜检
简便的方法是死猪耳静脉或四肢末梢的浅表血管采取血液、水肿液,或脾脏及病变器官组织制成涂片,用姬姆萨或瑞氏染色液或碱性美蓝染色,用显微镜检查,可以看到单个或短链(2~4个菌体)相连有荚膜的两端平截竹节状大杆菌,即可确诊。
猪体局部淋巴结涂片,炭疽的菌体形态常不典型,呈粗细不一菌链扭转状,菌体消失,可见荚膜“菌影”。
3、细菌分离培养
采取新鲜病料接种于普通琼脂平皿培养,若是污染或陈旧病料,可先做成悬液,70℃加热30min,杀死非芽孢菌后再接种培养;若为腐败病料,可先做成1:10乳剂接种小鼠,然后再取病料接种培养。根据菌落生长的特征做出判定。
如要与类属的蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌区分,可进行7噬菌体裂解试验、荚膜形成试验及炭疽串珠试验。
4、动物感染试验
将病料用无菌生理盐水稀释5~10倍,对小鼠皮下注射0.1~0.2mL,或豚鼠0.2~0.5mL,或家兔1mL,经24~36h(小鼠)或2~4天(豚鼠、家兔)被接种动物死亡。死亡动物的脏器、血液等抹片,经瑞氏染色镜检,可见多量有荚膜的成短链的炭疽杆菌。死亡动物可见注射部位胶样浸润和脾脏肿大。也可用病料进行培养及炭疽沉淀反应检查。
5、炭疽沉淀反应(Ascoli氏反应)
取病死猪的组织数克,剪碎或捣烂,加5~10倍生理盐水,煮沸10~15min,冷后过滤或离心沉淀,用毛细吸管取上清液,沿管壁慢慢加入已装有炭疽沉淀素血清(成品)的细玻璃管内,形成整齐的两层液面,在两液的接触面出现清晰的白色沉淀环判为阳性(反应在1~2min内出现,最好在10~15min观察)。
这个反应特异性高,操作简便、迅速,检出率高,即使腐败的炭疽病料,仍可出现阳性反应。县、乡兽医院(站)平时购入一定数量的沉淀血清,放冰箱保存备用,对及时确诊本病有现实意义。
6、酶联免疫吸附试验(ELISA)、聚合酶链反应(PCR)等也可用于炭疽病的诊断。