猪布鲁氏菌病的诊断方法

引起母猪发生流产的原因较多，特别是近些年一部分新的病毒性传染病的发生和流行，使诊断工作更为复杂。也就是说，病原性和非病原性的原因都可引起猪发生流产。

就布鲁氏菌病来说，流行病学、症状及剖检变化还是可以作为诊断的依据。但要确诊，必须有赖于实验室细菌学、血清学的检验，特别是本病多呈隐性感染，只有反复多次检验，方可达到早期诊断的目的。

一、猪布鲁氏茵病的特征

临诊上母猪的流产、公猪睾丸和附睾的炎症、流产胎儿状态，以及胎儿、胎衣及子宫、公猪睾丸的病理变化等都可作为初步诊断的依据。

二、细菌学检查

1、病料抹片、染色、镜检

流产胎儿、胎衣、分泌物中常有大量细菌，采集胎衣分泌物、流产胎儿的胃内容物、脾、肝、淋巴结、子宫坏死部分等组织做抹片，用革兰氏染色法染色见到革兰氏阴性菌，用柯兹洛夫斯基染色法染色，常可见到被染成淡红色的小球杆状菌，其他细菌或组织呈绿色。

2、分离培养

采取病料接种于10%马血清的马丁琼脂斜面。如病料有杂菌污染时，可用选择培养基培养。即是在100mL马丁琼脂或肝汤琼脂中，加人2500IU杆菌肽、10mg放线菌酮、600IU多黏菌素B，混合后倒人平皿中，供分离培养用。

接种病料后，37℃培养，每3天观察一次。如有细菌生长，挑选可疑的菌落做细菌鉴定，如抹片、染色、镜检。将疑似菌落进行纯培养，进一步做布鲁氏菌生物学特性检验，用抗血清做玻片凝集试验等。

3、动物接种

无菌取胎儿脾、肝、胃内容物，加生理盐水磨碎，取两只体重350～400g的豚鼠，腹腔或皮下注射1～2mL。接种前采血做布鲁氏菌凝集反应检查，接种后从第2周开始，每隔7～10天采血一次，做布鲁氏菌凝集反应，观察凝集反应滴度是否升高，若接种后凝集反应血清滴度达到1：5～1：10或更高时，即为阳性。同时扑杀豚鼠，可见淋巴结肿大，肝、脾肿大，并有灰白色细小的坏死结节。

取脾、肝和淋巴结做细菌分离培养，若分离培养有可疑菌落，则用已知布鲁氏菌阳性血清做凝集反应，凝集反应为阳性，则可确定为布鲁氏菌。若血清滴度达到1：5～1：10或更高，即使分离不出布鲁氏菌，也可诊断为布鲁氏菌病。

若接种动物临诊上不发病，剖检也无病变，细菌分离培养阴性，凝集反应阴性时可判为阴性。

4、血清学凝集反应

血清学诊断最具有实际意义。一般是细菌侵入机体后，经7～15天血液中就出现凝集抗体，随后凝集滴度逐渐增高。病畜流产后10天以上，大多数血凝滴度升高，阳性反应可保持几个月甚至2～3年以上。

因此，流产后采血时间要在7～10天以后为好。目前，广泛采用凝集反应，常用的有血清玻板凝集反应和血清试管凝集反应。具体操作方法及判定按农业部颁发的操作规程进行。

5、其他方法

补体结合反应：病畜感染后7～14天，血液中出现补体结合抗体，保持时间比凝集素要长，特异性和敏感性也高，对布鲁氏菌病诊断有特殊的诊断价值。

但由于此法操作复杂，一般实验室不做此项检查。近年来，还用间接红细胞凝集试验、间接碳凝集试验、抗球蛋白试验、酶联免疫吸附试验、荧光抗体法、DNA探针、PCR等检验本病。

6、鉴别诊断

猪布鲁氏菌病要与猪细小病毒感染、猪繁殖和呼吸障碍综合征、猪伪狂犬病、猪乙型脑炎、猪衣原体病、猪瘟、猪钩端螺旋体病、猪弓形虫病等引起的流产相区别。