临诊上所见各部位的特征性表现、坏死部病理变化、特殊臭味和相应的机能障碍,结合猪发病的流行病学特征,可初步做出疑似诊断。确诊需进行实验室检查。
1、病料抹片、染色、镜检
取病、健组织交界处组织,制成抹片,用等量酒精与乙醚混合液固定,用碱性复红-美蓝、稀释石炭酸复红或碱性美蓝染色,镜检可见佛珠状的长丝形菌体或细小杆菌。
2、细菌分离培养
将采取的病料,立即置厌氧条件下进行接种培养。为防止杂菌污染,最好将病料通过易感动物,获得纯培养后,再做进一步鉴定。或者初次分离时,用含0.02%结晶紫、0.01%孔雀和苯乙基乙醇的卵黄培养基,以抑制杂菌的生长;也有选用新霉素、万古霉素、链霉素作为抑菌剂的。
病料接种后马上放在含有10%CO2、80%N2、10%H2和以冷钯为催化剂的厌氧缸内培养,培养48~72h后,可见长出一种带蓝色的菌落,中央不透明,边缘有一圈亮的光带。
选出可疑菌落,再进一步做纯培养和进行生化特性鉴定。
3、动物试验
由于病料常有污染,可将病料用生理盐水或肉汤制成悬液,取0.5~1、0mL接种家兔耳外侧皮下,或0.2~0.4mL接种于小鼠尾部皮下。
实验动物,于接种后2~3天,接种局部发炎、坏死和脓肿,逐渐消瘦,局部坏死,8~12天死亡。取死亡动物肝、脾、肺和心脏等组织分离出坏死杆菌,便可做出诊断。